Tabla de contenido
¿Cómo se calcula la actividad específica de una proteína?
La actividad específica es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por mililitro de disolución (U/ml)….Según esto, podemos afirmar que:
- v1 = k1 [E] [S]
- v2 = k2 [ES]
- v3 = k3 [ES]
¿Cómo se purifica una proteína?
Técnicas empleadas
- Homogeneización.
- Fraccionamiento celular.
- Desnaturalización reversible con sulfato de amonio.
- Cromatografía.
- Electroforesis.
- Diálisis.
- Espectroscopia ultravioleta-visible.
- Ensayo enzimático.
¿Cómo se podría determinar la secuencia de la proteína purificada?
Para secuenciar una proteína siempre se debe partir de la proteína purificada. La purificación puede consistir en obtener la proteína pura en un tubo, a través de los métodos de purificación ya mencionados, o, aún si no está completamente homogénea, como una banda discreta en un gel de SDS-PAGE.
¿Cómo se calcula la actividad de una enzima?
La actividad catalítica de un enzima se determina midiendo la velocidad inicial de reacción, que es la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado ó sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero (Fig. 1).
¿Qué es la precipitación y la purificación de una proteína?
La precipitación con sulfato de amonio es uno de los métodos más comúnmente utilizados para la purificación y fraccionamiento de proteínas, ya sea a gran escala o a escala de laboratorio, que se puede utilizar para separar proteínas al alterar su solubilidad en presencia de una alta concentración de sal.
¿Que técnica se utiliza para purificar mitocondrias?
Para separar selectivamente las mitocondrias de otros orgánulos subcelulares se usó la centrifugación en gradiente de densidad. Dos soluciones de sacarosa a 0.6 y 1.8 M se prepararon mediante la disolución de sacarosa grado molecular en el volumen adecuado de Tris-HCl 50 mM pH 8.0 y KHP2O4 10 mM, pH 8.0.
¿Cómo se realiza la determinación de la estructura de péptidos?
La estructura de los péptidos se compone de un gran número de enlaces covalentes, que permiten la rotación de cada una de sus partes. Se llama conformación a cada una de las disposiciones tridimensionales que pueden adoptar los átomos de un péptido conservando todos sus enlaces covalentes.
¿Cómo pueden las proteínas ayb diferenciar una secuencia de la otra?
Cada cadena tiene su propio conjunto de aminoácidos, ensamblados en un orden determinado. Por ejemplo, la secuencia de la cadena A comienza con una glicina en el extremo N-terminal y acaba con una asparagina en el extremo C-terminal y es diferente a la secuencia de la cadena B.