¿Cómo se realiza un procedimiento para digerir el ADN con las enzimas de restricción?
Para digerir entre 0.1 a 1 µg de ADN en un volumen final de 20 µL se deben seguir los siguientes pasos:
- Tomar el ADN: genómico, plásmido o producto de PCR a digerir y llevar a un volumen total de 20 µL con agua ultrapura y esteril.
- Adicionar 2 µL del buffer apropiado (buffers 10 X: Buffers para Enzimas de restricción)
¿Por qué se llaman enzimas de restricción?
Estas endonucleasas se denominan enzimas de restricción debido a que restringen la permanencia de un ADN exógeno en la célula bacteriana que produce dicha enzima.
¿Cómo se digiere el ADN?
¿Cómo se corta y pega el ADN?
- Una enzima de restricción es una enzima que corta ADN y que reconoce sitios específicos en él.
- Si dos moléculas de ADN tienen extremos complementarios, la enzima ADN ligasa puede unirlos.
¿Cómo se aprovechan las enzimas de restricción para acoplar una sección de ADN humano en un plásmido?
La digestión con enzimas de restricción y la ligación como esta se realiza con muchas copias de ADN del plásmido y del gen. De hecho, en una sola ligación se utilizan ¡miles de millones de moléculas de ADN! Todas estas moléculas están chocando entre sí y con la ADN ligasa al azar y de diferentes maneras.
¿Cómo se asigna el nombre de las enzimas de restricción?
El nombre de una enzima de restricción se deriva del género y especie de bacteria de la que se aísla. La primera letra del nombre del género y dos primeras letras de la especie se combinan para formar el nombre de la enzima. Esto es seguido por una designación de la cepa si procede.
¿Qué son las enzimas de restricción?
2. INTRODUCCIÓN 2.1 ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Las enzimas de restricción se denominan también nucleasas de restricción, endonucleasas de restricción y en ocasiones restrictasas. Pertenecen a este grupo una gran diversidad de endodesoxirribonluceasas, descubiertas como enzimas propias de distintas bacterias.
¿Cuáles son los cofactores de las enzimas de restricción?
Estas enzimas requieren dos cofactores para su funcionamiento: el ATP y el magnesio. Las enzimas de restricción de este tipo poseen dos sitios de reconocimiento asimétricos, translocan el ADN de una manera dependiente de ATP y lo cortan entre 20 a 30 pb adyacentes al sitio de reconocimiento.
¿Por qué las enzimas de restricción tienen esos nombres tan raros?
[¿Por qué las enzimas de restricción tienen esos nombres tan raros?] Si ya conoces la replicación del ADN, tal vez ya te hayas encontrado con la ADN ligasa. En la replicación del ADN, el trabajo de la ADN ligasa es unir fragmentos de ADN recién sintetizados para formar una cadena continua.
¿Qué son los fragmentos generados por las enzimas de restricción?
Los fragmentos generados por las enzimas de restricción que han actuado sobre una molécula de ADN particular pueden ser empleados para recrear un “mapa” de la molécula original mediante el empleo de la información sobre los sitios donde la enzima cortó el ADN.