¿Qué es la mezcla maestra?
Mezcla maestra: es la mezcla de todos los componentes para llevar a cabo la PCR colocados dentro de un recipiente y con un volumen muy pequeño (ADN molde, iniciadores, dNTPs, iones y polimerasa); para después ser colocados en el termociclador. para separar el ADN que es de doble cadena.
¿Cuáles son los elementos de la PCR?
Los ingredientes clave para una reacción de PCR son Taq polimerasa, cebadores, ADN molde y nucleótidos (los bloques básicos del ADN). Los ingredientes se colocan en un tubo, junto con los cofactores que necesite la enzima, y se someten a ciclos repetidos de calentamiento y enfriamiento que permiten la síntesis del ADN.
¿Cómo funciona la sonda TaqMan?
Las sondas TaqMan son sondas de hidrólisis diseñadas para incrementar la especificidad de la PCR cuantitativa. Por lo tanto, la fluorescencia detectada en el termociclador de la PCR cuantitativa es directamente proporcional a la del fluoróforo liberado y la cantidad de ADN molde presente en la PCR.
¿Cuáles son los diferentes tipos de mezclas para PCR?
Comercialmente se encuentran disponibles juegos de mezclas para PCR, como PCR-super mixer, en los cuales incluyen total o parcialmente los reactivos requeridos, de tal forma que solo se requiere agregar la muestra a amplificar.
¿Cuáles son los problemas en los resultados del PCR?
Generalmente los problemas en los resultados del PCR, están relacionados con la cantidad y calidad de ácidos nucleicos.
¿Cuál es la temperatura ideal para realizar una PCR de 2 pasos?
Cuando los primers se alinean a temperaturas por arriba de 65°C, es recomendable realizar una PCR de 2-pasos (ver: Método de PCR). Extensión: la temperatura de extensión recomendada es de 68-72°C. Los tiempos de extensión generalmente son de 1 minuto por kilo base (Kb). Se recomienda una extensión final de 5 minutos a 68°C.
¿Cuánto tiempo se tarda en desnaturalizar la PCR?
Desnaturalización: inicialmente la PCR comienza con un ciclo de 2 a 4 minutos a 95°C para romper completamente la estructura secundaria del ADN molde. ¨Para PCR provenientes de secuencias ya amplificadas, la desnaturalización inicial se recomienda solo con 30 segundos a 95°C.